Риф что это такое анализ


Анализы: РИФ

Различают следующие методы проведения реакции иммунофлюоресценции: прямой, непрямой, с комплементом.

Когда назначается РИФ?

Реакция иммунофлюоресценции незаменима при диагностике сифилиса. Под воздействием флюорохрома возбудитель сифилиса определяется как клетка с желто-зеленой каймой. Отсутствие свечения означает, что пациент не заражен сифилисом. Этот анализ часто назначается при положительной реакции Вассермана. Данный метод очень эффективен при диагностике, так как позволяет определить возбудителя на ранних стадиях заболевания.

Кроме того, что РИФ позволяет диагностировать сифилис, его также применяют для определения наличия таких возбудителей как хламидии, микоплазма, трихомонады, а также возбудителей гонореи и генитального герпеса.

Как правильно подготовиться к анализу?

Для проведения анализа используют мазки или венозную кровь. Процедура взятия мазка совершенно безболезненная и не представляет никакой опасности. К сдаче данного анализа необходимо подготовиться. За двенадцать часов до него не рекомендуется пользоваться средствами гигиены, такими как мало или гели. Также иногда по показаниям врача проводиться провокация. Для этого рекомендуют прием острой пищи или алкоголя или проводится инъекция провоцирующего вещества, например гоновакцина или пирогенал. Помимо этого промежуток между приемом антибактериальных препаратов и сдачей анализа должен быть не менее четырнадцати дней.

При оценке результатов следует учитывать тот факт, что свечение наблюдается не только у живых бактерий, но и у мертвых, особенно это относится к хламидиям. После курса антибиотиков мертвые клетки хламидий также обладают свечением.

При правильной подготовке пациента и соблюдении техники взятия мазка, данный анализ позволяет определить заболевания на ранних стадиях, что очень важно для своевременного лечения. Положительными сторонами данного метода является короткие сроки получения результата, простота выполнения и небольшая стоимость анализа.

К недостаткам можно отнести то, что для проведения анализа необходимо достаточно большое количество исследуемого материала. Кроме того, оценку результатов может проводить только опытный специалист.

adkmed.kz

Реакция иммунофлюоресценции

Иммунофлюоресценция — это метод, основанный на использовании специфичности иммунологической реакции и чувствительности флюоресцентной микроскопии. В отличие от других методов маркировки постановка пробы и точная локализация иммунной реакции на поверхности клетки или ткани происходят довольно быстро. Один из компонентов иммунной реакции, как правило антитело, метится флюоресцирующим красителем (маркировка, конъюгирование). После возбуждения флюоресцирующего агента положение антигена становится доступным непосредственному наблюдению вследствие развития флюоресценции.

Иммунофлюоресцентный метод (РИФ, реакция иммунофлюоресценции, реакция Кунса) - метод выявления специфических АГ с помощью АТ, конъюгированных с флюорохромом. Обладает высокой чувствительностью и специфичностью.

Предложенный в 1941 г. Кунсом, этот метод после многочисленных усовершенствований прочно вошел в лабораторную практику. Метод включает следующие важные этапы: — получение, характеристика и маркировка антисывороток; — получение антигенного субстрата; — проведение анализа, т. е. обработка флюоресцирующими антителами; — микроскопический анализ флюоресценции препаратов.

В настоящее время используют преимущественно коммерческие препараты флюоресцирующих АС. Если необходимых флюоресцирующих сывороток нет, можно воспользоваться непрямым методом флюоресцентного маркирования, присоединив к исследуемому объекту антигена, к которому имеются меченые антитела. Очень редко приходится разрабатывать собственный препарат меченых флюоресцентным красителем антител. Работа с флюоресцирующими антителами, особенно оценка получаемых с их помощью результатов, требует определенных навыков. Всегда следует проводить анализ с учетом неспецифической или нежелательной специфической флюоресценции. Необходимо учитывать факторы, которые могут оказывать влияние на флюоресцентный анализ. К ним относятся:

 ► желательная специфическая флюоресценция: специфическое связывание меченых антител с соответствующим антигеном;  ► неспецифическая флюоресценция: неспецифическое отложение флюоресцирующих конъюгатов на различных тканевых структурах, например, вследствие избытка красителя или взаимодействия меченых антител с Fc-рецепторами; включение метки в другие сывороточные белки, кроме Ig, и неспецифическое связывание этих белков, например альбумина, фибронектина, аутофлюоресценция;  ► нежелательная специфическая флюоресценция: наличие перекрестных реакций или недостаточная специфичность самого конъюгата. В случае прямого иммунофлюоресцентного анализа возможно неспецифическое отложение меченых антител.

Применяется для экспресс-диагностики инфекционных заболеваний (идентификация возбудителя в исследуемом материале), а также для определения АТ и поверхностных рецепторов и маркеров лейкоцитов (иммунофенотипирование) и др. клеток.

Обнаружение бактериальных и вирусных антигенов в инфекционных материалах, тканях животных и культурах клеток при помощи флюоресцирующих антител (сывороток) получило широкое применение в диагностической практике. Приготовление флюоресцирующих сывороток основано на способности некоторых флюорохромов (например, изотиоцианата флюоресцеина) вступать в химическую связь с сывороточными белками, не нарушая их иммунологической специфичности.

Различают три разновидности метода: прямой, непрямой, с комплементом. Прямой метод РИФ основан на том, что антигены тканей или микробы, обработанные иммунными сыворотками с антителами, меченными флюорохромами, способны светиться в УФ-лучах люминесцентного микроскопа. Бактерии в мазке, обработанные такой люминесцирующей сывороткой, светятся по периферии клетки в виде каймы зеленого цвета. Непрямой метод РИФ заключается в выявлении комплекса антиген - антитело с помощью антиглобулиновой (против антитела) сыворотки, меченной флюорохромом. Для этого мазки из взвеси микробов обрабатывают антителами антимикробной кроличьей диагностической сыворотки. Затем антитела, не связавшиеся антигенами микробов, отмывают, а оставшиеся на микробах антитела выявляют, обрабатывая мазок антиглобулиновой (антикроличьей) сывороткой, меченной флюорохромами. В результате образуется комплекс микроб + антимикробные кроличьи антитела + антикроличьи антитела, меченные флюорохромом. Этот комплекс наблюдают в люминесцентном микроскопе, как и при прямом методе.

Механизм

На предметном стекле готовят мазок из исследуемого материала, фиксируют на пламени и обрабатывают иммунной кроличьей сывороткой, содержащей антитела против антигенов возбудителя. Для образования комплекса антиген — антитело препарат помещают во влажную камеру и инкубируют при 37 °С в течение 15 мин, после чего тщательно промывают изотоническим раствором хлорида натрия для удаления не связавшихся с антигеном антител. Затем на препарат наносят флюоресцирующую антиглобулиновую сыворотку против глобулинов кролика, выдерживают в течение 15 мин при 37 °С, а затем препарат тщательно промывают изотоническим раствором хлорида натрия. В результате связывания флюоресцирующей антиглобулиновой сыворотки с фиксированными на антигене специфическими антителами образуются светящиеся комплексы антиген — антитело, которые обнаруживаются при люминесцентной микроскопии.



biofile.ru

Анализ на хламидиоз расшифровка

Заболевание хламидиоз коварно тем, что развивается скрыто, и его симптомы напоминают другие женские болезни. Поэтому диагностировать его возможно лишь в лаборатории. Возбудители этого заболевания «живут» внутри клетки. И обычный мазок их присутствие не выявит. Специальный анализ крови либо соскоб с шейки матки и мочеиспускательного канала может указать на наличие этих паразитарных клеток. Моча и сперма могут также послужить диагностическим материалом для выявления заболевания. Хламидии настолько малы, что не каждый из перечисленных методов эффективен. Наибольшим процентом успешности из них обладает анализ крови на хламидии. Наиболее точный, практически 100%, результат дает ПЦР. А также достаточно часто прибегают к ПИФ, ИФА. Данные методы диагностики хламидиоза имеют свои плюсы и минусы.

В клиническом центре возможна диагностика хламидиоза с использованием любого диагностического материала, для проведения экспресс-теста, мазка, посева, ПЦР, анализа крови на хламидиоз, ИФА.

В аптеке можно приобрести экспресс-тест для диагностики в домашних условиях. Это наиболее быстрый и наименее точный анализ.

Мазок – исследование биологического материала под микроскопом. Источником биологического материала у мужчин является уретра либо секрет простаты, у женщин – влагалище, шейка матки, мочеиспускательный канал. Этот анализ несложен в исполнении, не доставляет неприятных ощущений пациентам. Но его точность также оставляет желать лучшего. Лишь при наличии очага воспаления анализ будет точным, так как, как правило, уровень лейкоцитов у больного хламидиозом незначительно повышен.

РИФ (реакция иммунофлюоресценции) – это анализ, для проведения которого производится забор материала из уретры квалифицированным специалистом. После окрашивания материала реагентами и его изучения под флюоресцентным микроскопом хламидии выявляются по особому типу свечения. Этот метод эффективен в 70 случаях из 100.

С помощью ИФА, или иммуноферментного анализа становится возможным выявление в крови пациента антител IgG, IgA, IgM, ответственных за противостояние хламидиям. Понятно, что присутствие данных антител является свидетельством хламидийного инфицирования. Такой анализ крови выявляет и болезнь как таковую, так и степень ее развития. Данные статистики говорят о 60 процентной точности данного анализа. К нему прибегают для диагностики пневмонии, заболеваний глаза, артрита, т.к. эти болезни могут развиться в результате инфицирования хламидиями.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) наиболее успешна, ее результаты наиболее достоверны. Для проведения ПЦ реакции не требуется много биологического материала. Помимо хламидиоза данная реакция выявляет и другие инфекции половых органов.

Посев, либо культуральный метод, - это способ выявления степени чувствительности к антибиотикам. Данный анализ требует помещения собранного материала в специальную среду и времени для выращивания бактерий. Кроме подробной информации о протекании заболевания результаты анализа показывают, какие медикаменты станут наиболее эффективными. Трудоемкость и высокая стоимость  этого анализа оправдывается высокими показателями достоверности.

Лишь комплексное исследование позволяет диагностировать хламидиоз, после чего назначить соответствующее лечение, требующее врачебного контроля, т.к. хламидиоз часто сопровождается гарднереллезом, трихомониазом, микоплазмозом и уреаплазмозом.

Подавляющее большинство случаев хламидиоза выявляется случайно при посещении гинеколога, уролога, андролога уже на хронической стадии. Хламидиоз провоцирует бесплодие, эрозию шейки матки, воспалительные процессы половых органов, тяжелое течение беременности, выкидыши, внутриутробное инфицирование. Женщину должна насторожить периодически проявляющаяся молочница. Белые творожистые выделения – это всегда сигнал о наличии микробов. Мужской организм на хламидиоз может отреагировать простатитом, уретритом, орхитом, эпидидимитом и пр.

Симптоматика половых инфекций схожа. Поэтому для точной диагностики необходим комплекс диагностических мер.

med-zabolevaniya.ru

Реакция иммунной флюоресценции (риф)

Реакция основана на том, что иммунные сыворотки обрабатывают флюорохромами (ФИТЦ), которые соединяются с антителами. Сыворотки при этом не теряют своей иммунной специфичности. При взаимодействии полученной люминесцентной сыворотки с соответствующим антигеном образуется специфический светящийся комплекс, легко видимый в люминесцентном микроскопе.

Различные иммунофлюоресцентные сыворотки могут быть использованы для прямого и непрямого метода иммунофлюоресценции. При прямом методе специфические флюоресцирующие иммунные сыворотки готовят для каждого микроба путем иммунизации кролика убитой культурой возбудителя, затем иммунную сыворотку кролика соединяют с флюорохромом (изоционат или изо-тиоционат флюоресцеина). Метод применяется для экспресс-диагностики с целью обнаружения бактериальных или вирусных антигенов.

Непрямой метод предусматривает использование диагностической иммунной не флюоресцирующей сыворотки (иммунизированного кролика или больного человека) и флюоресцирующей сыворотки, имеющей антитела против видовых глобулинов диагностической сыворотки.

Работа № 3

Иммуноферментный анализ (ифа)

Широкое применение находит твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА). Он основан на том, что белки прочно адсорбируются на пластинках, например из поливинилхлорида. Один из наиболее распространенных на практике вариантов ИФА основан на использовании меченных ферментом специфических антител той же специфичности. К носителю с иммобилизованными антителами добавляют раствор с анализируемым антигеном. В процессе инкубации на твердой фазе образуются специфические комплексы антиген-антитело. Затем носитель отмывают от не связавшихся компонентов и добавляют гомологичные антитела, меченные ферментом, которые связываются со свободными валентностями антигена в составе комплексов. После вторичной инкубации и удаления избытка этих меченных ферментом антител определяют ферментативную активность на носителе, величина которой будет пропорциональна начальной концентрации исследуемого антигена.

При другом варианте ИФА к иммобилизованному антигену добавляют исследуемую сыворотку. После инкубации и удаления не связавшихся компонентов с помощью меченных ферментом антиглобулиновых антител выявляют специфические иммунокомплексы. Данная схема является одной из наиболее распространенных при постановке ИФА.

*

+

Специфические Исследуемый материал- Специфические антитела Субстрат

антитела возбудитель с пероксидазой для пероксидазы

*

+

Исследуемая АГС, меченая

сыворотка пероксидазой Субстрат для

Специфический пероксидазы

антиген

Контроль:

позитивный - иммунная сыворотка, меченная пероксидазой + субстрат - 2 лунки;

негативный - нормальная сыворотка + субстрат - 2 лунки.

studfiles.net


Смотрите также