Главная » Разное » Эдта что это такое анализ

Эдта что это такое анализ


Пробы крови

Основным видом биологического материала, который подвергается анализу, является кровь. Кровь состоит из клеток (эритроциты, лейкоциты и тромбоциты) и жидкой части, которая представляет собой раствор многих неорганических и органических веществ. Эта и есть та жидкость, которую анализируют в большинстве лабораторных тестов. Поэтому первым этапом после взятия проб крови и перед отправкой их в лабораторию, является отделение жидкой части крови от клеток путем центрифугирования проб. Жидкая часть крови, которую получают после центрифугирования, может быть плазмой или сывороткой.

ПРОБЫ КРОВИ

1. Цельная кровь

Цельная кровь - проба венозной, артериальной или капиллярной крови в которой концентрация и свойства клеточных и внутриклеточных компонентов остаются относительно неизмененными по сравнению с состоянием in vivo. Добавление антикоагулянтов в пробу цельной крови стабилизирует клеточные и внутриклеточные компоненты на определенный период времени.

2. Сыворотка

Сыворотка - неразделенная внеклеточная часть крови после завершения адекватного процесса свертывания крови. Для отделения сыворотки от клеток крови в пробе крови, взятой у пациента, вакуумную пробирку следует оставить при комнатной температуре в течение, по меньшей мере 30 мин. Для получения качественной пробы важно выдержать полное время свертывания крови. Этот период может быть короче в случае использования активатора свертывания.

Преимущества использования сыворотки по сравнению с плазмой обусловлено тем, что добавление антикоагулянтов может вызывать интерференцию с некоторыми аналитическими методами лабораторного анализа или изменять концентрацию определяемых компонентов:

Интерференция - вмешательство постороннего фактора в результаты анализа.

3. Плазма

Если в вакуумную пробирку (вакутейнер) с пробой крови добавлен антикоагулянты, кровь остается жидкой (не сворачивается) и получаемая после центрифугирования жидкая часть, называется плазмой.

Преимущества использования плазмы:

Вследствие вызванных свертыванием крови в вакумной пробирке изменений некоторые исследования дают достоверные результаты, только при использовании плазмы (например, нейроспецифическая енолаза, серотонин, аммиак).

АНТИКОАГУЛЯНТЫ

Антикоагулянты - это добавки, которые тормозят процесс свертывания крови и/или плазмы, что обеспечивает отсутствие существенных изменений исследуемых компонентов перед аналитическим процессом.

  1. ЭДТА
  2. Цитрат
  3. Гепарин
  4. Гирудин

Свертывание крови предотвращается путем связывания ионов кальция (ЭДТА, цитрат натрия) или торможением активности тромбина (гепарин, гирудин). Твердые или жидкие антикоагулянты, находящиеся в вакуумных пробирках должны быть смешены с кровью немедленно после взятия проб крови.

1. ЭДТА

ЭДТА - соль этилендиаминтетрауксусной кислоты. Используют двукалиевую (К2), трикалиевую (К3) и двунатриевую (Na2) соли. Концентрации: от 1,2 до 2,0 мг/мл крови (от 4,1 до 6,8 ммоль/л крови) из расчета безводной ЭДТА. Для гематологических исследований предпочтительно использовать вакуумные пробирки с К2 ЭДТА, так как он обеспечивает большую стабильность размера клеток крови и не разбавляет образец.

2. Цитрат

В вакуумных пробирках для исследования системы гемостаза используется жидкий трехзамещенный цитрат натрия (дигидротринатрия цитрат Na3C6H5O7*2h3O) в концентрации:

Согласно рекомендациям ВОЗ и Национального комитета по стандартизации в клинической лаборатории (США) предпочтительнее использовать 0,109 моль/л (3,20%) тринатрийцитрат лимонной кислоты. Для исследования показателей системы гемостаза рекомендуется смесь одной части цитрата с 9 частями крови.

Для определения скорости оседания эритроцитов (СОЭ) используют 0,105 моль/л (3,13%) тринатрийцитрат лимонной кислоты. При исследовании СОЭ смешивают одну часть цитрата с 4 частями крови.

В целях обеспечения стабильности образцов крови для исследования показателей гемостаза в вакуумных пробирках используются комплексные наполнители (цитрат натрия/теофиллин,/аденозин/дипиридамол) Пробирки с этим наполнителем используют для обычных рутинных тестов, мониторинга терапии гепарином, анализе антигепаринового фактора тромбоцитов 4, β-тромбомодулина. Пробирки с комплексным наполнителем нельзя использовать для исследования агрегации тромбоцитов. Соотношение антикоагулят/кровь в этих пробирках 1:9 при концентрации цитрат натри 0,109 моль/л (3,20%). Вакуумные пробирки с комплексным наполнителем рекомендуются при централизации исследований системы гемостаза.

3. Гепарин

Для получения стандартизованной гепаринизированной плазмы рекомендуется от 12 до 30 международных единиц (МЕ)/мл нефракционированной натриевой, литиевой или аммиачной соли гепарина с молекулярной массой от 3 до 30 кД.

Титрованный по кальцию гепарин при концентрации от 40 до 60 МЕ/мл (сухая гепаринизация) и от 8 до 12 МЕ/мл крови (жидкая гепаринизация) рекомендуется для определения ионизированного кальция.

4. Гирудин

Гирудин представляет собой антитромбин, экстрагированный из пиявок или полученный с помощью генно-инженерного синтеза. Гирудин тормозит тромбин, образуя комплекс гирудин- тромбин в соотношении 1:1. Используется в концентрации 10 мг/л.

ЦВЕТОВАЯ КОДИРОВКА ВАКУУМНЫХ ПРОБИРОК С АНТИКОАГУЛЯНТАМИ

В стандарте ИСО 6710 представлены следующие цветовые коды антикоагулянтов:

Цветовая кодировка крышек вакуумных пробирок соответствует цветовым кодам, используемых в них антикоагулянтов.

clinlabs.com

EDTA — общее описание свойств, применение в медицине и промышленности

В координационной химии переходные металлы связываются с ионами или некоторыми соединениями в водных растворах. Эти ионы известны как лиганды, а вместе целое соединение называется координационным. Несколько соединений обладают способностью связываться с центральным атомом металла более чем один раз, и описываются как полидентат, что дословно переводится как«много зубчатый». Эти соединения описаны таким образом потому, что они прикрепляются к центральному атому в нескольких точках. Этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA) является таким полидентатным лигандом. В частности, этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA) представляет собой гексадентатный лиганд, так как гекса — означает шесть и лиганд прикрепляется шесть раз.

Этилендиаминтетрауксусная кислота (EDTA) —  общее описание, свойства 

EDTA или этилендиаминтетрауксусная кислота, связывает в общей сложности 6 мест (4 кислородных и 2 азотных) на ионе в растворе. Молекулы, которые связываются в нескольких точках в координационном соединении, называются хелатирующими.

Рисунок 1: Полностью протонированная форма EDTA4-, h5EDTA. Непротонированная формаобразуется в связи с удалением атомов водорода на каждой из четырех групп карбоновых кислот. В не протонированной молекуле, этилендиаминтетрауксусная кислота имеет дополнительные, непарные электроны на четырех атомах кислорода, которые имеют одинарные связи с атомами углерода и на двух атомах азота.

Хелат склоняет молекулы быть более термодинамически стабильными, а хелатные соединения имеют тенденцию вытеснять монодентаты в координационных соединениях в растворе. Это вызвано, в частности, тем, что реакции с возрастающей энтропией являются самопроизвольными, и «хотят» случаться больше. Например, смотрите приведенный ниже пример уравнения, в котором EDTA вытесняет водные лиганды:

Fe(h3O)3+6 + EDTA4-⇌

Здесь, водный комплекс железа превращается в молекулу железа, окруженной одной молекулой этилендиаминтетрауксусной кислоты. Это происходит потому, что в левой части уравнения существуют две молекулы – комплексное соединение железа и этилендиаминтетрауксусной кислоты — в то время как на правой стороне уравнения находятся семь молекул – новое комплексное соединение железа и шесть молекул воды, вытесненных лигандом EDTA. Энтропически-благоприятные реакции происходят самопроизвольно, и увеличение числа молекул является увеличением энтропии. Таким образом, указанная выше реакция происходит самопроизвольно, со значением K, превышающим 1025. Общая тенденция, что является логичным, будет означать, что полидентатные лиганды, которые имеют больше «зубов» или связывающих точек с центральными атомами, являются более термодинамически выгодным / стабильными, и,таким образом, могут использоваться для вытеснения более слабых, монодентатных лигандов. Этилендиаминтетрауксусная кислота может связываться в общей сложности шесть раз, как, например, указано в уравнении с железом, приведенном выше, так что это очень хорошая молекула для вытеснения других лигандов.

Рисунок 2: молекула EDTA связывается в общей сложности шесть раз до общего центрального металла, обозначенного буквойM. Обратите внимание, что атомы с неспаренными электронами (два атома азота и четыре атома кислорода) создают эти ковалентно-координационные связи. 

Промышленное применеие этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA)

Благодаря хорошей способности смещения молекул в координационных комплексах, этилендиаминтетрауксусная кислота может быть использована для предотвращения негативных реакций и вредного воздействия на продукты, вызванных присутствуем нежелательных металлов в небольших количествах. Данное применение известно, как секвестрация. Например, в отношении косметических средств, этилендиаминтетрауксусная кислота служит для повышения устойчивости косметического средства по отношению к молекулам в воздухе. Аналогичным образом, в продукции личной гигиены и ухода за кожей, EDTA связывается со свободными ионами металлов и служит в качестве очищающего средства и консерванта. Это в основном уменьшает «жесткость» (или присутствие катионов металлов) в водопроводной воде для того, чтобы другие ингредиенты в шампунях и мыле могли справляться со своей задачей очистки более эффективно. В том же ключе этилендиаминтетрауксусная кислота используется в моющих средствах для смягчения воды, которая входит с ней в контакт, таким образом, что другие активные ингредиенты могут очищать эффективнее. В текстильной промышленности этилендиаминтетрауксусная кислота предотвращает обесцвечивание окрашенных тканей путем удаления ионов вредных свободных металлов, что также позволяет избавиться от оставшихся осадков в промышленном оборудовании, которое используется при высоких температурах (т. е. духовые шкафы). В общем, этилендиаминтетрауксусная кислота снижает реактивность металла, предотвращая любые нежелательные эффекты, которые могут возникнуть в результате его присутствия. EDTA используют в солевой форме, чаще всего, в форме динатриевой этилендиаминтетрауксусной кислоты или кальция динатриевой соли этилендиаминтетрауксусной кислоты.

Медицинское применеие этилендиаминтетрауксусной кислоты (EDTA)

Помимо применимости в промышленности, этилендиаминтетрауксусная кислота также может быть использована в медицине. Врачи могут назначать этилендиаминтетрауксусную кислоту пациентам, страдающим свинцовым отравлением. Такое лечение называется хелаторная терапия, при которой EDTA перерабатывает токсичные ионы, присутствующие в организме, в безвредные. EDTA вводится внутривенно и распространяется по организму через поток крови. Учитывая её гексадентатную природу, этилендиаминтетрауксусная кислота имеет молекулярную структуру, похожую на клешни. Благодаря такой структуре EDTA выталкивает токсичные тяжелые металлы, обнаруженные в крови, и привязывается к ионам этих металлов. Это связывание образует соединение, которое выводится из организма через мочу, не позволяя им связываться с энзимами и цитохромами. Хелаторная терапия может включать в себя комплекс процедур и одна процедура может длиться от одного до трех часов. Хелаторная терапия не только выводит вредные ионы свинца из организма, но она также может помочь в безопасном избавлении от ионов ртути, хрома, кобальта, никеля, цинка, мышьяка и таллия из кровотока. В случае избыточного потребления дигоксина, препарата, используемого для лечения предсердечной фибрилляции, трепетании предсердий и даже сердечной недостаточности, этилендиаминтетрауксусная кислота используется для очистки кровеносного потока от неиспользованных ионов.

Воздействие этилендиаминтетрауксусной кислоты на окружающую среду

EDTA очень полезна в качестве полидентатного лиганда. К сожалению, в настоящее время она настолько широка в применении, что считается загрязнителем окружающей среды. В конечном итоге она расщепляется до этилендиаминтетрауксусной кислоты, потеряв одну кислотную группу и становится токсичной после того, как она образует дикетопиперазин. Уровни этилендиаминтетрауксусной кислоты в настоящее время наблюдаются с помощью методик анализа масс-спектрометрии, хотя и считается, что уровень острой токсичности очень низок.

Вопросы:

  1. Сколько раз этилендиаминтетрауксусная кислота делает связывание в координационном комплексе?
  2. В каком порядке (по убыванию) располагаются термодинамически стабильные вещества в качестве лиганда: ONO, en(этилендиамин), EDTA.
  3. Каковы наиболее распространенные формы этилендиаминтетрауксусной кислоты?
  4. Почему этилендиаминтетрауксусная кислота так широко используется? Почему это является проблемой?
  5. Что профессор Ларсен обычно относит к этилендиаминтетрауксусной кислоте?

Ответы:

  1. EDTA является гексадентатнымлигандом, который означает, что он связывается шесть раз. Он дважды связывается с ионами азотами и четыре раза с ионами кислорода.
  2. EDTA (который связывается шесть раз), en (который связывается два раза), ОNО (который связывается один раз)
  3. EDTA используется наиболее часто в виде солей и в сухом виде.
  4. EDTA является отличным хелатирующим агентом, что позволяет осуществлять несколько привязок в координационном комплексе. Это дает ему возможность вытеснять другие нежелательные лиганды из-за энтропии и термодинамики, и, таким образом, он широко используется в лабораториях, на заводах, а также в медицине. Проблемой, связанной с его чрезмерным распространением, является то, что он деградирует в токсин. Широко используя EDTA, создается больше токсинов, которые остаются в окружающей среде.
  5. «Кракен», потому что это конечный лиганд (он связывается шесть раз, что является очень большим показателем для связывания лиганда).

apple-green.ru

Общий анализ крови + лейкоцитарная формула + СОЭ (кровь с ЭДТА)

Общий анализ с лейкоцитарной формулой. В понятие общего анализа крови входит комплекс показателей, позволяющих оценить систему кроветворения, насыщение крови гемоглобином, выявить воспалительные реакции и др.

Общий анализ крови является первым обязательным лабораторным исследованием, которое назначается любому человеку независимо от возраста, цели обследования, предполагаемого заболевания.

Гемоглобин (Hb) – сложный белок, являющийся основным компонентом эритроцитов. Гемоглобин участвует в процессах связывания и транспорта кислорода. Он не только переносит кислород от легких к периферическим тканям, но и ускоряет транспорт углекислого газа от тканей к легким. Концентрация гемоглобина у здорового человека зависит от возраста и пола. При патологии уровень гемоглобина может значительно изменяться. Так, снижение гемоглобина наблюдается при различных видах анемий, о характере которых судят по нескольким лабораторным показателям и клиническим данным. Повышение значений: – эритремиях – заболеваниях крови с избыточным синтезом эритроцитов – симптоматических эритроцитозах (например, при пороках сердца, тяжелой сердечно-легочной недостаточности, заболеваниях почек, при пребывании на высокогорье).

Эритроциты или красные кровяные тельца, представляют собой безъядерные клетки. Основная функция эритроцитов – транспортировка кислорода и углекислого газа. Эта функция обеспечивается специальным пигментом – гемоглобином, имеющим в своем составе железо. Кроме того, эритроциты участвуют в транспорте аминокислот, антител, токсинов и ряда лекарственных веществ. Количество эритроцитов – один из наиболее важных показателей общего анализа крови. Снижение числа эритроцитов в крови (эритроцитопения) является одним из признаков анемии. Степень эритроцитопении варьирует при различных формах анемии. Так, при железодефицитной анемии на почве хронической кровопотери количество эритроцитов может быть в норме или незначительно снижено. При острой кровопотере, В12-дефицитной, гипопластической и гемолитической анемиях количество эритроцитов в крови снижается значительно, что может потребовать проведения неотложных лечебных мероприятий (переливание крови и др.). Кроме анемий, относительное снижение количества эритроцитов может наблюдаться при увеличении объема циркулирующей крови при беременности (но чаще имеет место железодефицитная анемия беременных), гипергидратации (избыток жидкости, например при массивной инфузии растворов, острой почечной недостаточности и т.д.) и некоторых других состояниях. Повышение количества эритроцитов в крови (эритроцитоз) – один из типичных признаков эритремии (заболевание крови с избыточным синтезом эритроцитов). Кроме того, увеличение числа эритроцитов нередко наблюдается при хронических заболеваниях легких, пороках сердца, наличии аномальных гемоглобинов, чрезмерной физической нагрузке, пребывании на больших высотах, ожирении. Некоторые злокачественные заболевания печени и почек также могут сопровождаться эритроцитозом. Относительный эритроцитоз (вследствие уменьшения объема циркулирующей крови) может наблюдаться при дегидратации (обезвоживании), алкоголизме и некоторых других состояниях. Эритроцитарные индексы - это расчетные величины, позволяющие количественно характеризовать важные показатели состояния эритроцитов. MCV – средний объем эритроцита (mean cell volume). Это более точный параметр, чем визуальная оценка размера эритроцитов. Однако он не является достоверным при большом количестве эритроцитов с измененной формой. На основании значения MCV различают анемии микроцитарные (дефицит железа, талассемия), нормоцитарные и макроцитарные. Микроцитоз характерен для железодефицитных анемий, макроцитоз – для В12- и фолиеводефицитных. Апластическая анемия бывает нормо- или макроцитарной. Повышение: – Мегалобластная анемия (В12-дефицитная, фолиеводефицитная) – Макроцитоз (апластическая анемия, гипотиреоз, болезни печени, метастазы злокачественных опухолей) – Курение и употребление алкоголя Снижение MCV: – Гипохромные и микроцитарные анемии (анемия при дефиците железа, хронической патологии, талассемия) – Гемоглобинопатии – Гипертиреоз (редко) MCH - среднее содержание гемоглобина в эритроците (mean cell hemoglobin). Вычисляется в абсолютных единицах делением величины концентрации гемоглобина на число эритроцитов. Этот параметр определяет среднее содержание гемоглобина в отдельном эритроците и аналогичен цветовому показателю, но более точно отражает синтез Hb и его уровень в эритроците. На основании этого индекса анемии можно разделить на нормо-, гипо- и гиперхромные. Нормохромия характерна для здоровых людей, но может встречаться и при гемолитических и апластических анемиях, а также анемии, связанной с острой кровопотерей. Гипохромия обусловлена уменьшением объема эритроцитов (микроцитоз) или снижением уровня гемоглобина в эритроците нормального объема. Т.е. гипохромия может сочетаться как с уменьшением объема эритроцитов, так и наблюдаться при нормо- и макроцитозе. Гиперхромия не зависит от степени насыщения эритроцитов гемоглобином, а обусловлена только объемом красных кровяных клеток. Повышение МСН: – Мегалобластные анемии (витамин В12 и фолиеводефицитные) – Заболевания печени – Ложное повышение (множественная миелома, гиперлейкоцитоз) Понижение MCH: Железодефицитная анемия MCHC (mean cell hemoglobin concentration) - средняя концентрация гемоглобина в эритроците. Рассчитывается путем деления концентрации гемоглобина крови (в г/100 мл) на гематокрит и умножения на 100. Показатель отражает насыщение эритроцита гемоглобином; характеризует отношение количества гемоглобина к объему клетки. Не зависит, таким образом, от объема клетки, в отличие от МСН. Повышение МСНС: Сфероцитоз врожденный и другие сфероцитарные анемии Понижение МСНС: – Железодефицитная анемия – Талассемия – Некоторые гемоглобинопатии Гематокрит отражает долю эритроцитов в общем объеме крови. Повышение концентрации наблюдается при эритроцитозах, дегидратации (заболеваниях желудочно-кишечного тракта, сопровождающихся профузным поносом, рвотой; диабет), уменьшении объема циркулирующей плазмы (перитонит, ожоговая болезнь). Снижение наблюдается при анемиях, повышении объема циркулирующей плазмы (сердечно-сосудистая и почечная недостаточность, поздние сроки беременности), хронических воспалительных процессах, травмах, длительном постельном режиме, голодании, онкологических заболеваниях. Лейкоциты или белые кровяные клетки, образуются в костном мозге и лимфатических узлах. Основной их функцией является защита от чужеродных агентов. Определенные типы лейкоцитов обеспечивают уничтожение микробов, инородных веществ и продуктов распада клеток, а также участвуют в формировании иммунитета. Эти клетки способны к активному перемещению. Током крови они разносятся по всему организму, проникают в различные органы и ткани, где проявляют наибольшую активность. Лейкоциты неоднородны, среди них выделяются разные типы клеток, о количестве которых можно судить по лейкоцитарной формуле. Содержание лейкоцитов в циркулирующей крови – важный диагностический показатель. Их количество зависит от образования этих клеток в костном мозге и скорости их выхода в ткани. У здорового человека число лейкоцитов может значительно меняться в зависимости от приема пищи, физического и умственного напряжения. Повышение количества лейкоцитов в периферической крови называют лейкоцитозом. К основным причинам лейкоцитоза относятся: инфекции (бактериальные, грибковые, вирусные); любые воспалительные состояния; травмы; заболевания крови (лейкозы, при которых число лейкоцитов в крови увеличивается в десятки раз); злокачественные новообразования. Снижение числа лейкоцитов в крови называется лейкопенией. Заболевания и состояния, сопровождающиеся лейкопенией: – вирусные инфекции (корь, краснуха, инфекционный мононуклеоз и др.); – аплазия и гипоплазия костного мозга, – угнетение его функций при длительной полихимиотерапии, облучении и др.; – длительный прием некоторых антибактериальных, противовоспалительных, противосвертывающих -препаратов; – ионизирующее излучение; Истощение костномозговых резервов лейкоцитов при некоторых длительно текущих острых инфекциях (тиф, паратиф, сальмонеллез и др.). Лейкоцитарная формула – это процентное соотношение разных видов лейкоцитов в крови. Исследование лейкоцитарной формулы является важным лабораторным тестом, дающим диагностическую информацию о характере многих заболеваний, тяжести состояния больного, эффективности проводимого лечения. В лейкоцитарной формуле определяют следующие виды лейкоцитов: Нейтрофилы осуществляют защиту организма от инфекций. Наиболее часто количество нейтрофилов увеличивается при острых воспалительных, инфекционных заболеваниях, при некрозе тканей, интоксикациях. Эозинофилы участвуют в развитии аллергических реакций. Их количество повышается чаще всего при аллергических состояниях и глистных инвазиях, реже – при опухолях и некоторых коллагенозах. Базофилы участвуют в аллергических и воспалительных реакциях. Их количество возрастает при любых аллергических заболеваниях, некоторых болезнях крови, гипотиреозе и др. Лимфоциты являются главными клетками иммунной системы, обеспечивающими адекватный иммунный ответ организма при попадании чужеродных агентов. Содержание лимфоцитов в крови возрастает при инфекционном мононуклеозе, многих других вирусных инфекциях, а также при заболеваниях лимфатической системы и крови. Моноциты – клетки, обеспечивающие фагоцитоз, т.е. «пожирание» чужеродных микроорганизмов. Моноцитоз – повышение количества моноцитов – характерен для многих инфекций: туберкулеза, инфекционного мононуклеоза, сепсиса. Он встречается при заболеваниях крови, коллагенозах. Тромбоциты – кровяные пластинки, основной функцией которых является тромбообразование. Тромбоциты способны «прилипать» к поврежденному участку сосудистой стенки, склеиваться между собой и таким образом формировать первичный тромб, который позже укрепляется плазменными факторами свертывания крови. При дефиците тромбоцитов эти процессы нарушаются, и у человека появляется кровоточивость. Наиболее часто снижение уровня тромбоцитов отмечается при: – заболеваниях крови (некоторые виды анемий, острый лейкоз, др.) – наследственном дефиците тромбоцитов – аутоиммунных заболеваниях (антифосфолипидный синдром, коллагенозы, др.) – некоторых инфекциях (преходящие тромбоцитопении при септических процессах, вирусных инфекциях) – метастатическом поражении костного мозга – лекарственных влияниях (прием аспирина и других дезагрегантов, некоторых антибактериальных средств, др.). Возможно незначительное кратковременное снижение числа тромбоцитов в крови в предменструальный период и первые дни менструаций. Увеличение количества тромбоцитов характерно для многих злокачественных процессов, некоторых заболеваний крови, инфекций. Относительный тромбоцитоз возможен при сгущении крови (например, при обезвоживании).

c-clinica.com

Учебное пособие по теме «взятие крови из периферической вены»

Сохрани ссылку в одной из сетей:

4.2.2. Вакуумные пробирки: виды, цветовая кодировка

Вакуумные пробирки представляют собой основной компонент для взятия венозной крови. Пробирки производятся из стекла или специального материала полиэтилен-терфталата (пластика и стекла), который отличается особой прочностью и препятствует газообмену. Они изготовляются и стерилизуются в заводских условиях, предназначены для одноразового применения. Пробирки выпускаются различных объемов и размеров и уже содержат все реагенты и добавки, необходимые для проведения анализа. Вакуум в пробирках обеспечивает взятие необходимого объёма крови и, соответственно, позволяет гарантировать соблюдение правильного соотношения крови и реагента.

Пробирка состоит из трех основных частей:

Вакуумные пробирки с наполнителем (не реагентом) содержат в себе гель либо гранулы, и используются в случаях, когда требуется разделить составляющие крови. Гель обволакивает сгущенную кровь, обособляя ее от сыворотки, гранулы же превращаются в своеобразный барьер, работая аналогично гелю.

Для некоторых видов анализов добавлен реагент (литий, гепарин, ЭДТА).

Вакуумные пробирки закрываются резиновыми пробками или специальными крышками Hemogard, которые обеспечивают безопасность лаборанта при работе с пробой. Цвет крышки указывает на вид наполнителя и назначение пробирки. Цветовая кодировка пробирок соответствует международному стандарту ISO 6710.

Пробирки для получения сыворотки

Сыворотка крови – наиболее часто используемый материал в клинико-диагностических лабораториях. Для получения сыворотки кровь должна полностью свернуться.

Пробирки для получения сыворотки бывают двух видов – стеклянные и пластиковые. В стеклянных пробирках функцию активатора свертывания выполняет непосредственно само стекло, так как в его состав входит кремний, ускоряющий процесс коагуляции. В пластиковые пробирки для ускорения процесса коагуляции добавляются активаторы свертывания – кремнезем и/или тромбин. Пробирки могут содержать также специальный гель либо гранулы для четкого отделения сыворотки от сгущенной крови.

Стеклянные пробирки без наполнителя и пластиковые пробирки с кремнеземом для исследования сыворотки различают по красной крышке (рис. 5, а). Пробирки для получения сыворотки с тромбином отличаются окрашенностью крышки или резиновой пробки в оранжевый цвет (рис. 5, б, в). Тромбин является природным активатором свертывания и значительно сокращает время образования сгустка (3-5 мин.). Пробирки с тромбином применяются для ускоренного получения сыворотки, поэтому чаще всего используются для экспресс-анализов, когда требуется срочно получить сведения о составе крови пациента, к примеру, в реанимационной палате и т.д.

Производятся стеклянные пробирки, в которых содержится только тромбин, и пластиковые пробирки с комплексным наполнителем – тромбин с кремнеземом. Также производятся пробирки с тромбином и гелем, время свертывания крови в которых 3-5 минут.

После заполнения пробирку с тромбином следует обязательно перемешать путем переворачивания 5-6 раз. Полное свертывание крови происходит за 5 минут.

Пробирки с гелем для получения и отделения сыворотки производятся только из пластика, и их можно отличить по желтой крышке (рис. 5, г). С целью лучшего отделения сгустка крови от сыворотки в пробирки добавлен гель. После взятия пробы пластиковые пробирки следует перемешать путем переворачивания 5–6 раз.

а б в

Рис. 5. Пробирки для получения сыворотки:

а – с активатором свертывания (пластиковые);

б – с тромбином;

в – с тромбином и гелем;

г – с гелем.

г

Пробирки для исследования плазмы

Для получения плазмы в пробирках используется литиевая или натриевая соль гепарина, распыленная на внутреннюю поверхность пробирки. Гепаринизированную плазму обычно используют для биохимического и иммунологического анализа.

Основное действие гепарина – торможение перехода растворимого фибриногена в нерастворимый фибрин вследствие блокирования активности тромбина.

Пробирки без геля с гепарином (гепарин лития или гепарин натрия) отличаются зеленым цветом крышки. Гепарин лития используется для клинических анализов крови, гепарин натрия – при подборе дозы и мониторинге терапии препаратами лития. Пробирки с гепарином и разделительным гелем для получения плазмы имеют светло-зеленую крышку, в них используется только литиевая соль гепарина. Сразу же после заполнения пробирки и извлечения ее из держателя пробу необходимо тщательно перемешать путем переворачивания 8-10 раз. Центрифугирование следует производить сразу после взятия крови.

а б

Рис. 6. Пробирки для получения плазмы: а – с гепарином; б – с гепарином и гелем.

Пробирки для коагулологических исследований

При взятии образцов для исследования системы гемостаза стандартным антикоагулянтом является цитрат натрия. Его механизм действия основан на связывании ионизированного кальция крови, что ведет к обратимому блокированию процесса коагуляции.

Выпускаются как стеклянные, так и пластиковые пробирки с крышкой голубого цвета (рис. 7). Для предотвращения испарения цитрата натрия пластиковые пробирки изготовляются по особой технологии из разного рода пластика и имеют двойные стенки.

Очень важно соблюдать правильное соотношение крови к антикоагулянту как 9:1. Недостаток цитрата в пробе ведет к образованию микросгустков и коагуляции пробы, а избыток – к искажению результатов за счет связывания кальция из реагентов.

При взятии пробы в несколько пробирок у одного пациента пробирка с цитратом должна заполняться до пробирки с активатором свертывания. Сразу после взятия образца пробирку необходимо аккуратного перемешать 4-5 раз.

Для проведения некоторых коагулологических анализов также могут использоваться пробирки с комплексным наполнителем CTAD (Цитрат натрия/Теофиллин/Аденозин/Дипиридамол).

Рис. 7. Пробирки с цитратом натрия.

Пробирки для гематологических исследований

В качестве антикоагулянта в пробирках для гематологических исследований цельной крови используется ЭДТА (калиевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты). Противосвертывающее действие ЭДТА обеспечивается за счет связывания ионов кальция в крови. В пробирках со светло-лиловой (сиреневой) крышкой антикоагулянт находится в виде раствора или порошка, распыленного на внутреннюю поверхность пробирок (рис. 8).

Для обеспечения правильного соотношения крови и антикоагулянта пробирка с ЭДТА должна заполняться точно до указанного объема. Недостаток ЭДТА в пробе приводит к ее коагуляции, а избыток – к сморщиванию клеток крови и искажению таких клинических показателей, как гематокрит, размер клеток и т.д.

Сразу после взятия крови в пробирку с ЭДТА ее необходимо тщательно перемешать, переворачивая 8-10 раз.

Рис. 8. Пробирки для гематологических исследований цельной крови.

Пробирки для специальных тестов

Пробирки для исследования глюкозы

Для стабилизации глюкозы используются пробирки с серой крышкой и следующими наполнителями: фторид натрия и оксалат калия, йодоацетат и лития гепарин, фторид натрия и ЭДТА.

Пробирки должны заполняться полностью до указанного на них объема. После взятия пробы пробирки следует перемешать, переворачивая 6-8 раз. Поскольку пробирки с фторидом/оксалатом особенно подвержены гемолизу, их необходимо перемешивать с особой осторожностью.

Рис. 9. Пробирки для исследования глюкозы.

Пробирки для исследования микроэлементов

Микроэлементы находятся в крови в крайне малых количествах, поэтому используемые материалы должны исключать возможность загрязнения образца инородными примесями. Это возможно при применении специальных пробирок с крышкой синего цвета (рис.10).

Пробирки предназначены для исследования цинка, железа, меди, кальция, селена в крови; а также токсикологических исследований свинца, кадмия, мышьяка, сурьмы.

Взятие образца и пробоподготовка производятся в соответствии с используемым наполнителем: они могут быть с активатором свертывания, К2-ЭДТА или гепарином натрия или без наполнителя. При анализе сыворотки на наличие микроэлементов в следовых количествах не рекомендуется использовать стандартные пробирки с красной крышкой, так как они содержат повышенную концентрацию цинка и других микроэлементов.

При взятии крови у одного пациента сразу в несколько вакуумных пробирок необходимо пробирку для микроэлементов следует заполнять последней для снижения вероятности загрязнения пробы через иглу.

Рис. 10. Пробирки для исследования микроэлементов.

Пробирки для исследования нестабильных гормонов белковой природы

Для сохранения нестабильных ферментов и гормонов белковой природы в пробирках вместе с антикоагулянтом ЭДТА используется ингибитор протеиназы – апротинин. Он применяется для стабилизации таких гормонов и ферментов, как ренин, адренокортикотропный гормон, глюкогон, соматостин, кальци-тонин, остеокальцин, b-эндорфин, секретин, нейротензин, вазоактивный интестинальный пептид. Апротинин содержится в пробирках объемом 5-10 мл с розовой пробкой.

Пробирки для определения группы крови с розовой крышкой

Эти пробирки используются как для определения группы крови, так и для перекрестной пробы при переливании крови. Выпускаются без наполнителя, с кремнеземом (активатор свертывания) или К2ЭДТА. Специальная этикетка на пробирке удобна для записи информации о доноре и пациенте.

Рис. 11. Пробирки для определения группы крови.

Пробирки для стабилизации цельной крови (для иммуногематологии)

Пробирки для стабилизации цельной крови содержат комбинированный наполнитель ACD, состоящий из активного антикоагулянта тринатрия цитрата, лимонной кислоты, которая обеспечивает буферный раствор с тринатрия цитратом, и декстрозы, являющейся питательным веществом для эритроцитов. Стеклянные пробирки с ACD можно отличить по светло-желтой крышке, они обычно используются в отделениях иммунной гематологии для анализа поверхностных антигенов лейкоцитов (HLA-типирование, некоторые приложения проточной цитометрии, исследование функций лейкоцитов и специальные иммунологические тесты).

В пробирках наполнитель ACD присутствует в виде раствора (тип А или В). Цельная кровь смешивается с образцом в соотношении 1:6 (1 часть ACD обеих концентрации к 6 частям образца).

Сразу же после заполнения пробирки с ACD пробу необходимо тщательно перемешать путем переворачивания 8-10 раз.

Рис. 12. Стеклянные пробирки с ACD для иммуногематологии.

Пробирки для измерения СОЭ по методу Вестергрена

Система для определения скорости оседания эритроцитов (СОЭ) по методу Вестергрена состоит из вакуумных пробирок для взятия венозной крови и штатива с градуированной шкалой.

Стерильные стеклянные пробирки, закрытые черной крышкой Hemogard, содержат раствор цитрата натрия. При полном заполнении пробирки кровью (5,2 мл) достигается соотношение крови и антикоагулянта, равное 4:1.

Штатив рассчитан на 10 пробирок, каждая ячейка снабжена механизмом, с помощью которого совмещается уровень пробы в пробирке с нулевой отметкой шкалы штатива. Измерение СОЭ проводится в закрытой первичной пробирке, при этом пробу не нужно переливать и дополнительно разбавлять.

Хранить образец до анализа нужно при комнатной температуре, вдали от солнечного света и отопительных приборов. Анализ необходимо провести в течение 6 часов после взятия пробы. Для этого необходимо пробирка помещается в специальный штатив, стоящий на ровной горизонтальной поверхности. В течение всего времени проведения теста штатив должен оставаться неподвижным. Далее совмещают нулевую метку с мениском образца и по истечении 60 минут зафиксируют показатели СОЭ по градуированной шкале штатива между осевшими эритроцитами и плазмой.

Рис. 13. Система BD Seditainer для определения СОЭ по методу Вестергрена.

Пробирки для проведения анализов методами молекулярной диагностики

Пробирки для получения плазмы и проведения анализов методами молекулярной диагностики

Эти пластиковые стерильные пробирки используются для взятия крови, пробоподготовки, транспортировки и хранения образца неразбавленной плазмы. Пробирки различаются по крышке жемчужно-белого цвета и применяются для определения вирусной нагрузки при ВИЧ-инфекции и вирусных гепатитах, а также для проведения анализов методами молекулярной диагностики (например, ПЦР) и идеально подходят для хранения и транспортировки плазмы.

Пробирки содержат антикоагулянт К2ЭДТА в виде порошка, распыленного на стенках пробирки, и полиэстерный гель, позволяющий отделить плазму от клеток крови во время центрифугирования.

Рис. 14. Пробирки для отделения плазмы с К2ЭДТА и гелем

(молекулярная диагностика).

Сразу же после заполнения пробирки и извлечения ее из держателя кровь необходимо тщательно перемешать с антикоагулянтом, аккуратно переворачивая 8-10 раз. Образец до центрифугирования следует хранить при комнатной температуре не более 2-х часов, вдали от солнечного света и отопительных приборов.

Плазму в пробирках можно хранить в замороженном виде при -70°C. В пробирках стабильность РНК ВИЧ и вируса гепатита С сохраняется в течение 72 часов при комнатной температуре.

Пробирки для выделения мононуклеарных клеток крови (моноцитов и лимфоцитов)

Пробирки позволяют отделить мононуклеарные клетки периферической крови в один прием, причем в одной первичной пробирке, внутренние стенки которой покрыты силиконом для минимизации неспецифической активации клеток.

Пробирки выпускаются двух видов:

Пробирки содержат антикоагулянт разделительный гель и специальную жидкость фиколл, создающую градиент плотности для разделения мононуклеаров. Данные пробирки предназначены для:

Сразу же после извлечения пробирки с кровью из держателя ее необходимо аккуратно перевернуть 8–10 раз. Образец до центрифугирования следует хранить при комнатной температуре не более 2-х часов, вдали от солнечного света и отопительных приборов.

gigabaza.ru

Смотрите также