Главная » Разное » Иммуноферментный анализ это что

Иммуноферментный анализ это что


Метод иммуноферментного анализа (ИФА)

Метод иммуноферментного анализа (ИФА)

Метод иммуноферментного анализа является современным методом лабораторного исследования крови на присутствие в ней антител к вирусам и антигенов к возбудителям болезни. Этот метод способен не только выявить этиологию, но еще и определить стадию заболевания. Результаты анализа имеют качественный и количественный показатель.

Для чего проводиться иммуноферментный анализ:

Преимущества иммуноферментного анализа состоят в том, что он гарантирует высокий уровень специфичности результатов и имеет высокую чувствительность (больше 90 %) к возбудителям инфекций. ИФА является доступным методом диагностики, который выполняют в каждом медицинском центре. Также, с помощью такого метода можно определить не только заболевание, но и следить за процессом его развития, сравнивая количество выработанного в крови белка, в разные промежутки время.

Единственным недостатком ИФА, пожалуй, является то, что с его помощью нельзя определить возбудителя инфекции, а можно только выявить иммунный ответ на этот возбудитель.

Основные термины иммуноферментного анализа (ИФА)

Сначала разберемся с некоторыми понятиями, чтобы разобраться в принципе проведения лабораторного исследования.

Иммунный комплекс – это комплекс антител и антигенов, присутствующих в крови, и участвующих в иммунном процессе.

Антигены – это вещества, которые имеют органическое происхождение и образовываются в результате той или иной болезни в клетках организма. Причиной этому может стать аутоиммунное или онкологическое заболевание. Также, антигенами могут быть вещества различных возбудителей инфекционных заболеваний.

Авидность антител — это показатель прочности связи между антигеном и антителом, а также количество антигена, которое вступило в связь с антителами (иммуноглобулинами). Это очень важный показатель, поскольку с его помощью можно определить дату инфицирования человека, что очень важно при заражении на протяжении срока беременности.

Тест на авидность проводится в лабораторных условиях путем обработки комплекса антитело-антиген мочевиною, что разрушает белок. При этом, соединения с низкой авидностью разрушаются, а соединения, имеющие высокую авидность остаются неповрежденными. Результаты теста на авидность выражаются в процентном соотношении.

Антитела (иммуноглобулины) – это специальный белок, который вырабатывают лимфоциты, то есть иммунные клетки, при попадании в организм человека бактерий, вирусов или грибов (инфекционного патогена). Существуют иммуноглобулины пяти видов: A, E, M, G, D. Они отличаются друг от друга массой, формой, участием в инфекционном процессе, периодом полураспада, сроками образования с момента заражения.

Самый большой молекулярный вес имеет иммуноглобулин IgM (пентамер), он весит 950000 дальтон, в то время как остальные имеют вес в пределах 150 – 200 000 дальтон. Из-за своих размеров IgM не проходят через плацентарный барьер. В сыворотке из крови основную массу занимают иммуноглобулины IgG, их процентное соотношение занимает приблизительно 80 %. А самую малую часть в сыворотке занимают антитела IgE – 0,003%. В инфекционном процессе участвуют иммуноглобулины IgG, IgМ, IgА. В то время, как IgE являются результатом аллергических реакций. Такие белки как IgD принимают участие в формировании местного иммунитета и образовываются в лимфоузлах и миндалинах.

Основы метода иммуноферментного анализа

Основы метода иммуноферментного анализа

Существует несколько видов ИФА, среди них прямой, непрямой, конкурентный и метод блокирования. Хотя на практике, лаборанты чаще всего используют твердофазный гетерогенный иммунный анализ, который называется ELISA (enzyme linked immunosorbent assay).

Принцип проведения иммуноферментного анализа проявляется в реакции антитела и антигена, при которой образовывается иммунный комплекс – антиген-антитело. Такая реакция приводит к тому, что ферментная активность меток на поверхности антител изменяется.

Чтобы разобраться в этом, рассмотрим этот процесс поэтапно.

Первый этап. На этом этапе лаборант, проводящий исследование, размещает на поверхность лунок планшета очищенный антиген инфекционного возбудителя. Затем, к возбудителю добавляют сыворотку крови больного, что провоцирует специфическую реакцию между антителом в крови и антигеном. Это полученное соединение и участвует в следующем этапе эксперимента.

Второй этап. На втором этапе исследования происходит образование иммунных комплексов, которые являются реакцией между антигеном, полученным на первом этапе, и конъюгатом, то есть иммуноглобулином, помеченным ферментом пероксидазы. При этом добавляется специфический хромоген. В результате реакции получается окрашенное соединение в лунке. Интенсивность цвета при этом зависит от количества иммуноглобулинов, содержащихся в крови пациента.

Третий этап. На третьем этапе лаборанты обычно занимаются оценкой результатов исследования. Для этого проводится фотометрирование с использованием спектрофотометра, сравнение плотности биологического материала с плотностью проб, также, проводится математический подсчет результатов. Уровень иммуноглобулинов в крови зависит от плотности лунки планшета. В практике чаще всего применяют 96 луночные планшеты.

Когда происходит измерение оптической плотности (сокращенно ИП) крови, то проводят подсчет антител в одной единице объема. После чего полученный результат сравнивают с контрольным материалом. Важно помнить о том, что для каждого метода исследования устанавливаются свои показатели, с помощью которых учитываются референтные значения теста. Это показатели патологий и норм. Поэтому, нужно помнить об этом в каждом конкретном случае. Нельзя проводить интерпретацию результатов одного исследования в иное. Также, нельзя и сравнить результаты отдельно взятых лабораторий.

Заболевания выявляющиеся ИФА диагностикой

С помощью иммуноферментного анализа, можно выявить наличие в организме таких заболеваний:

1) Инфекционные болезни

2) Показатели состояния человеческого иммунитета и маркеры аутоиммунных болезней. 3) Онкологические заболевания (хронический гонадотропин, простатспецифический антиген, альвеомуцин, фактор некроза опухоли, раково-эмбриональный антиген и другие). 4) Эндокринные заболевания.

5) Нарушения работы репродуктивной системы.

В список включены не все заболевания, которые могут быть диагностированы с помощью ИФА, этот перечень можно продолжать.

Исследования

Забор материала для исследования методом иммуноферментного анализа.

Для исследований методом ИФА у пациентов могут быть взяты спинномозговое вещество, жидкость стекловидного тела, околоплодные воды, слизь, выделенная из цервикального канала или уретры, а также мазки. Но самым распространенным образцом для исследований является все же кровь пациента.

Забор образцов крови проводится утором, натощак. При этом, нельзя принимать пищу или какие-либо медицинские препараты. Что же касается разного рода терапий, которые включают антибактериальное лечение, лечение от вирусов, паразитов и другие, то их необходимо прекратить не менее, чем за две недели до сдачи анализа.

Результаты иммуноферментного анализа обычно изготавливаются в течение суток. Задержек происходить не должно, хотя при больших скоплениях сывороток, лаборанты могут просто не успеть сделать анализ вовремя.

Результаты исследований методом иммуноферментного анализа

Результаты исследований

Оценивая результаты проведенных исследований на выявление каких-либо инфекций, особое значение имеет количество иммуноглобулинов, обнаруженных в крови, а также, их вид. От этих показателей зависит присутствие в организме инфекции или же ее отсутствие. Также, сравнив количественные и качественные показатели, лаборант может определить предполагаемую стадию развития болезни, а также отличить острую форму заболевания от хронической формы. Оценивают также и наличие в организме человека активного вируса, что проявляется при обостренной хронической или острой форме заболевания. Приблизительное время, через которое происходит появление в крови иммуноглобулинов Ig.

Дело в том, что IgМ являются самыми быстро появляющимися антителами. Обнаружение их происходит уже через 1 – 3 недели после процесса инфицирования организма, это является признаком острой фазы заражения вирусом человека.

Также, подобные антитела можно обнаружить в крови пациента при обострении протекания хронической болезни. Количество антител IgМ сохраняется около 3 месяцев с момента их образования, потом они постепенно начинают исчезать. Хотя случаются и исключения. Например, некоторые пациенты после окончательного выздоровления сохраняют количество антител в своей крови. Так, циркуляция иммуноглобулинов проходит через несколько лет после заражения.

У таких пациентов необходимо проверять положительные показатели на присутствие IgМ антител, поскольку возможны ситуации, когда система тестирования допускает ошибку и выдает ложно положительный результат. Такие ситуации очень часто случаются с беременными женщинами.

Что же касается появления антител IgA, то они способны образоваться через 2 или 4 недели после того, как организм подвергся действию инфекции. Но обнаружить антитела можно только через месяц. Именно тогда количество их достигает оптимального для выявления числа.

Антитела IgA вырабатываются клетками лимфоузлов, селезенки, а также слизистых оболочек. Подобные иммуноглобулины способны концентрироваться на поверхностях слизистых оболочек органов, где и выполняют свою защитную функцию, участвуя в местном иммунитете человека.

Появление антител IgG прослеживается тестирующими системами уже на 4 неделе прогрессирования инфекционного процесса в организме. Титр таких иммуноглобулинов постепенно может увеличиваться в течение 2 месяцев. После выздоровления небольшой их титр сохраняется в организме и поддерживает иммунитет. Такие болезни как хламидиоз, трихомониаз и микоплазмоз характеризируются невысоким уровнем антител IgG в крови, что объясняется отсутствием стойкого иммунитета к таким инфекциям.

Классы

Варианты выявления в крови человека иммуноглобулинов разных классов.

При обнаружении антител IgA вместе с антителами IgG означает активацию хронической формы инфекции. Иммуноглобулины появляются в крови через 2 недели после обострения болезни. Авидность антител является показателем прочности связи между антигеном и антителом, а также количество антигена, которое вступило в связь с антителами (иммуноглобулинами). Это дополнительный этап в диагностике методом ИФА.

Это очень важный показатель, поскольку с его помощью можно определить дату инфицирования человека, что очень важно при заражении на протяжении срока беременности. А также, можно оценить все риски внутриутробного инфицирования ребенка.

Тест на авидность проводится в лабораторных условиях путем обработки комплекса антитело-антиген мочевиною, что разрушает белок. При этом, соединения с низкой авидностью разрушаются, а соединения, имеющие высокую авидность остаются неповрежденными. Результаты теста на авидность выражаются в процентном соотношении. Высокая авидность антител свидетельствует о хронической форме болезни, либо же является признаком стойкого иммунитета.

Особенности появления антител в крови грудных детей

Если у детей в возрасте до года или до 1,5 лет в крови обнаружены материнские IgG, то это значит, что антитела проникли в организм ребенка через плаценту во время вынашивания плода. Этот признак не может свидетельствовать об инфицировании малыша, а является передавшемся от матери иммунитетом к инфекции.

Но, если в маленьком организме обнаружено иммуноглобулины класса IgM, которые из-за своего веса не могут проникнуть через плаценту к малышу, то это является признаком инфицирования. Заражение могло произойти уже после рождения или же в период внутриутробного развития.

Количественный метод иммуноферментного анализа.

Результат диагностики заболеваний методом ИФА представлен в определенных единицах измерения:

  1. ОП – оптическая плотность образца – это уровень концентрации антител в одной единице объема. Чем выше этот показатель, тем больше находится иммуноглобулинов в крови.
  2. Некоторые результаты ИФА подразумевают наличие такой единицы как коэффициент позитивности – КП. Это тоже обозначение плотности образца.
  3. Единицы концентрации иммуноглобулинов выражены в нанограммах, миллилитрах или же в нг/мл.
  4. Титры сывороток крови выражены так: 1:20, 1:40, 1:100, 1:200, 1:400, 1:800, 1:1200 и тому подобное.
  5. Титры, при которых происходит диагностирование заболевания для разных инфекций разные.
  6. В результатах исследования присутствуют такие символы : «-», «+»,«?» (+, ++, +++, ++++).
  7. Качественная же оценка подразумевает наличие только одного пункта из двух: положительно либо отрицательно.

Правильность интерпретации результатов данного исследования зависит от квалификации врача, поскольку кроме специалиста никто не имеет права назначать лечение.

Специалисты оценивают количество антител в крови, их вид и концентрацию.

Также, необходимо помнить о том, что нельзя сравнивать результаты разных методов исследования, либо же результаты тестов, полученные в разных лабораториях. Поскольку для любого метода диагностики существуют свои показатели и единицы измерения.

Сравнивание результатов допустимое только в пределах одной и той же лаборатории.

Видео метода иммуноферментного анализа ИФА

simptomlecheniye.ru

ИФА анализ - иммуноферментный анализ крови: что это такое? Расшифровка, диагностика и как проводится исследование, принцип метода

ВАЖНО! Статья носит ознакомительный характер. Найти клинику или врача вы сможете используя следующую форму! Не занимайтесь самолечением!

Иммуноферментный анализ (ИФА) – это современный способ распознавания огромного количества возбудителей болезней, основанный на способности человеческого организма вырабатывать так называемые антитела в ответ на обнаружение чужеродных веществ – антигенов.

В настоящее время ИФА анализ крови используется:

Так, например, широкое распространение этот метод получил при диагностике следующих заболеваний:

Что касается общемедицинской практики, то в этом случае иммуноферментный анализ крови позволяет:

Материалом для исследования в данном случае может являться как венозная кровь, так и жидкость, находящаяся в стволе спинного мозга, секрет стекловидного тела, околоплодные воды.

Иммунная и ферментативная реакции

Как явственно следует из названия, анализ крови ИФА включает в себя несколько составляющих, а именно – иммунную и ферментативную реакции. Иммунная реакция позволяет связать клеточные элементы и болезнетворные микроорганизмы, а ферментативная дает возможность визуализировать и оценить результат предыдущей реакции.

Рассмотрим каждую реакцию более подробно.

Что такое иммунные реакции?

Иммунными называются специфические реакции, позволяющие связать антиген с антителом и создать иммунный комплекс. Что же это значит? В первую очередь, необходимо понимать, что любая клеточная поверхность содержит молекулы, содержащие данные о клетке, называющиеся антигенами и подразделяющимися на:

Индивидуальные антигены, несмотря на некоторую схожесть, имеют и множество различий. Они имеются у одного конкретного организма и никогда не повторяются в других. Видовые антигены можно обнаружить в организмах тех или иных видов живых существ. Так, например, обезьяны, лошади или собаки имеют свой, ни на что не похожий антиген. Именно поэтому антигены этого типа используются иммунной системой для распознавания своих и чужих клеток, что, собственно говоря, и лежит в основе иммуноферментного анализа крови.

Как распознаются антигены? Здесь все достаточно понятно. Говоря простым языком, клетка, являющаяся иммунной, отлавливает клетку, вызвавшую у нее «подозрение», и сравнивает ее антиген с имеющимся в памяти описанием. Если антиген вызвавшей сомнение клетки соответствует ему, то иммунная клетка «отпускает» ее и отправляется дальше. Если же описание отличается, то ответ организма на угрозу один – уничтожение. Причем распознавание «врага» в данном случае равняется почти 100%.

Что собой представляет антитело?

По своей сути антитело, имеющее огромное значение при использовании метода ИФА, является специальной молекулой, существующей на поверхности иммунной клетки и позволяющей последней связаться с антигенами сомнительного микроорганизма. Именно антитело служит проводником данных, позволяющих оценить угрозу, и именно оно получает сигнал о том, какой является сомнительная клетка – своей или чужеродной. В случае, если захваченная клетка является «своей», антитело выпускает антиген и высвобождает его «хозяйку».

Для чего нужен иммунный комплекс?

Как уже говорилось несколько ранее, при распознавании чужеродной клетки антитело не выпускает антиген чужеродной клетки. Наоборот, посылая определенные сигналы, оно зовет на помощь «подкрепление». В данном случае речь идет о том, что все остальные антитела, расположенные в другой части клетки, являющейся иммунной, начинают движение к участку, сигнализирующему об опасности, и связывают себя с захваченным антигеном, фиксируя его и окружая со всех сторон. После того, как антиген будет полностью окружен, начинается уничтожение чужеродного микроорганизма.

Антитела

Антитела, которые позволяет выявить ИФА диагностика, представляют собой белковые структуры – иммуноглобулины, подразделяющиеся на несколько видов:

Однако для диагностики берется лишь один вид антител, являющийся наиболее специфичным в отношении искомых микроорганизмов. Как правило, подобными антителами являются разновидности IgG и IgM.

Что такое ферментативные реакции?

Ферментативными называются реакции, позволяющие одно вещество превратить в другое. Материал, на который воздействуют в ходе исследования крови методом ИФА, носит название «субстрат», а материал, получаемый под воздействием фермента, носит название «продукт реакции». Причем особенности данного процесса таковы, что воздействовать тот или иной фермент может исключительно на конкретный субстрат. Подобное свойство фермента определять «свой» субстрат носит название «сродство». Исходя из вышесказанного, становится предельно понятно, что с каждым ферментом связана исключительно одна, специфичная исключительно для него реакция.

При этом стоит отметить, что метод ИФА диагностики подразумевает использование не более десятка реакций ферментативного типа, вследствие которых образуются колорированные вещества, позволяющие использовать для определения концентрации возбудителя метод химической реакции – колориметрию.

Что такое колориметрия?

Колориметрия – это способ измерения концентрации вещества в зависимости от того, какой является плотность окраски раствора, подразумевающий использование специально предназначенного для этого прибора – колориметра.

Причем в этом случае возможны две вариации зависимости плотности окраски раствора от его концентрации:

В первом случае плотность окраски раствора увеличивается при увеличении его концентрации, во втором же плотность окраски раствора снижается при увеличении его концентрации. Технически это осуществляется следующим образом. Берутся несколько растворов, обладающих определенной концентрацией вещества, производятся замеры их плотности, и далее выстраивается график зависимости плотности окраски раствора от его концентрации. Затем измеряется плотность окраски испытуемого раствора, и по выстроенному графику находится величина его концентрации, находящаяся в соответствии с замеренной плотностью окраски раствора.

Причем использующиеся для замера колориметры после единичной калибровки способны сами отстроить кривую калибровки, остающуюся в их памяти и позволяющую им работать в режиме автомата. Стоит отметить, что в ИФА крови, как правило, используются такие ферменты, как авидин, пероксидаза и щелочная фосфотаза.

Способы проведения ИФА

В зависимости от способа проведения исследование ИФА подразделяется на прямое и обратное. Рассмотрим каждый из способов более подробно.

Что такое «прямой иммуноферментный анализ»?

Прямой иммуноферментный анализ подразумевает использование антител к определяемому антигену, соединенных специальной меткой, являющейся субстратом реакции, носящей ферментативный характер. Исходя из этого, прямой ИФА — это анализ забранного у пациента биологического материала, помещенного в лунки с последующим добавлением антител к антигену того или иного заболевания.

Таким образом, при выявлении сифилиса в лунки будут добавлены антитела против сифилитических антигенов, полученные на производстве и закупленные лабораторией. Полученная смесь оставляется на время, требуемое для того, чтобы антитела захватили «свой» антиген. Причем, как было сказано ранее, антитела, запускающие реакцию, связываются и со специфической меткой.

Ввиду того, что антител добавляется много, далеко не все они смогут захватить антиген в случае его нахождения в пробе. Для того, чтобы избавиться от лишних антител, жидкость из лунок выливается. Антитела же, связавшиеся с антигенами, остаются на их поверхности. Затем приступают ко второй части анализа на ИФА – ферментативной реакции. В лунки добавляется ферментный раствор и оставляется в них на полчаса либо на час. Вполне естественно, что добавленный фермент аналогичен метке, связывающей антитела. В конце реакции в лунке оказывается вещество, приобретшее соответственный оттенок.

Окрашенное вещество исследуется колориметром. Причем ввиду того, что метка, имеющаяся в лунке, уже связалась с антителами, концентрация окраски образовавшегося там вещества будет соответствовать концентрации антител, аналогичной по размеру количеству антигенов. Таким образом, анализ позволяет понять, сколько выявляемых микроорганизмов или гормонов содержится в забранной пробе.

Что такое непрямой иммуноферментный анализ?

Непрямой анализ крови на ИФА производится в 2 этапа. На первом этапе используются антитела без меток, добавляемые к требуемым определения антигенам, а на втором – антитела с метками к первым антителам без меток. Таким образом удается осуществлять двойной контроль реакции:

Осуществляется анализ следующим образом. У пациента забирается биологический материал, вносится в лунки и оставляется до того момента, пока антигены не приклеятся к их поверхности. Затем к нему добавляются антитела без меток и оставляются на время, требуемое для того, чтобы они связались с имеющимися антигенами, создав требуемый иммунный комплекс. После того, как процесс связывания будет окончен, излишние антитела удаляются посредством выливания жидкости из лунок.

По окончании этого процесса берутся следующие антитела (помеченные), добавляются в лунки и оставляются на время, требуемое для образования комплекса из 2-х антител и антигена. Затем раствор также выливается (с целью удаления излишних антител).

На следующем этапе непрямого анализа крови методом ИФА вносится фермент, превращающий «метки» в вещество, имеющее цвет. Развитие окраски в данном случае занимает от пяти минут и до получаса. После проявления окраски производят колориметрию и определяют концентрацию раствора, имеющего окраску. Ввиду того, что данная величина в указанном случае соответствует концентрации антител с метками, которая равна концентрации антигена, в конце исследования можно получить представление о количественном содержании возбудителя заболевания.

Как расшифровываются анализы крови методом ИФА?

В современном мире медицины расшифровка анализа крови методом ИФА позволяет не только диагностировать заболевание, но и понять, в каком состоянии оно находится по типу антител, присутствующих в данный момент в организме. Таким образом, всего один анализ позволяет определить острую или хроническую стадию течения болезни. Так, например, присутствие антител IgM говорит о том, что заболевание находится в стадии острого течения.

Подобный тип антител возникает сразу же после заражения и находится в организме только что заболевшего человека. Затем антитела IgM исчезают. Таким образом, при наличии этих антител требуется сразу же назначить лечение.

При наличии антител Ig G, появляющихся в организме после того, как человек выздоровел, и находящихся в нем постоянно, необходимости в лечении нет ввиду того, что они лишь говорят о процессах, приобретших хроническую форму. Антитела подобного вида являются своеобразным маркером того, что больной когда-то перенес это заболевание и остался его носителем на всю жизнь.

Если же в биологическом материале обнаруживаются и антитела IgM, и Ig G, расшифровка иммуноферментного анализа будет говорить о том, что у больного произошло обострение хронического заболевания, требующее проведения соответствующей терапии. Существует и еще один типа антител – Ig А, который говорит об острой стадии заболевания. Такие антитела сохраняются в организме на протяжении 4-5 недель и исчезают после выздоровления. Наличие подобных антител говорит о том, что больной является потенциальным переносчиком того или иного заболевания.

ВАЖНО! Данная статья написана при участии профессионального врача высшей категории. Тем не менее редакция портала venerologiya.ru НАСТОЯТЕЛЬНО рекомендует не заниматься самолечением, а сдать анализы или записаться на прием в ближайшую клинику в ВАШЕМ ГОРОДЕ!

venerologiya.ru

Иммуноферментный анализ крови

Иммуноферментный анализ крови – это высокоэффективная и современная методика клинической диагностики целого ряда заболеваний. Суть данной методики состоит в выявлении активности определенных антител. ИФА крови используется не только лишь для определения существующих патологий человеческого организма, а и в ходе экспериментальных исследований, где требуется особая точность определения процентных концентраций соединений в биологическом материале.

Принцип диагностики

Иммуноферментный анализ — это выявление специфических антител посредством биохимических реакций. Если человек заболевает, и в его организм попадает чужеродный агент (антиген), то иммунная система начинает активно вырабатывать особые белки или антитела, которые уничтожают антигены. В результате их «столкновения» образуются соединения антиген-антитело.

Именно на их количественный и качественный анализ направлены иммуноферментные исследования. К примеру, если в процессе диагностики нужно выявить конкретный вирус в биоматериале крови пациента, то в нее добавляют антитела, которые считаются специфическими к вирусу.

И наоборот, ИФА реакция на выявление антител заключается во введении в образцы крови определенных антигенов. Особые реагенты ИФА используются в диагностике для того, чтобы сделать биохимическую реакцию более четкой.

Человеческому организму также свойственны неспецифические факторы защиты. Неспецифические антитела — это белки, которые действуют губительно на большое количество вредоносных микроорганизмов. Их не используют при проведении ИФА.

Показания к проведению

ИФА исследование проводят по рекомендации врачей в следующих случаях:

Варианты проведения

В современной медицине иммуноферментное исследование применяют в двух вариантах: твердофазном и гистохимическом. Последний вариант используют в диагностике крайне редко. Материалом для исследования в этом случае может быть мазок ИФА, группы клеток, срезы парафиновые или отпечаток диагностируемых органов.

Твердофазный ИФА – это метод анализа, при котором один из участвующих в реакции компонентов (либо антитело, либо антиген) фиксируется на специальном твердом носителе. Это могут быть шарики, микропанели или палочки из полистирола. Данный иммунохимический метод — это гарантия идентификации и обнаружения антигена. Во время диагностики также можно будет выявить характерные антитела и выделить их титр в кровяной сыворотке.

Существует прямой и непрямой способ твердофазного исследования. Для выявления антигенов в лаборатории используют прямой метод, который также имеет название сэндвич метод. Для его осуществления берутся антитела, специфические к выявляемому антигену. Их помещают в лунки микропанели, куда позже вносится и сам антиген. Содержимое нагревают до 37 °С и выдерживают определенное время до самого введения помеченных ферментом антител.

Добавление раствора серной кислоты вызывает химическую реакцию. При положительном результате образцы окрасятся в оранжевый или желтый цвет. Анализ на наличие антител и определение их титра выполняют непрямым твердофазным ИФА.

Виды иммуноглобулинов, которые определяет анализ

Классификация состоит из 5 основных типов иммуноглобулинов человека: IgA, IgG, IgE, IgM и IgD. Для медицины большое практическое значение имеют лишь несколько из них (А, G, М).Иммуноглобулин класса А (или IgA) выполняет функцию защиты от инфекций слизистых, желудочно-кишечного аппарата, мочевыделительной системы и органов дыхания. В начале недуга выявить данные иммунные комплексы не представляется возможным, они проявляют себя только на 2 неделе заболевания или позже.

Иммуноглобулины IgM характеризуют острую фазу патологического процесса в организме. Их можно идентифицировать в крови уже на 5 сутки болезни. Анализ ИФА при беременности в некоторых случаях выдает завышенный показатель IgM, что не всегда является показателем инфицирования.

Иммуноглобулины класса G (или IgG) выявляют остаточный иммунный процесс. Первое их появление в образце крови приходится на 5-6 неделю болезни. Потом IgG могут присутствовать в течение всей жизни пациента, защищая его от рецидива заболевания и даже полностью исключая вторичное развитие патологий. При выявлении маркеров иммунной системы и аутоиммунных патологических процессах показатели IgG отличаются по своей природе. Например, Igg от Igg4 отличается тем, что первый иммуноглобулин общий, а второй – секреторный.IgE используют только в исследованиях паразитологии.

Иммуноглобулин IgD локализуется в лимфоцитах. В небольшой концентрации его можно обнаружить в крови каждого здорового человека. Количество этого компонента резко возрастает во время вынашивания ребенка, поэтому анализ на ИФА при беременности имеет некоторые отклонения. IgD повышен у больных астмой и людей с иммунодефицитом.

Проведение диагностики

Материалом для проведения ИФА служит венозная кровь, которая забирается из локтевой вены пациента. Рекомендуемый объем – 5-10 мл. Как только материал будет взят, его отправляют в диагностическую лабораторию.

Если все правила были соблюдены, то результат предоставят уже на следующий день.

Чтобы результат ИФА был достоверным, врачи настоятельно рекомендуют выполнить следующие правила подготовки:

  1. сдавать анализ на ИФА разрешается только натощак.
  2. последний прием пищи должен произойти за несколько часов до сна (исключить стоит жирные, копченые и мясные продукты).
  3. за несколько суток до визита в лабораторию нужно отказаться от приема препаратов.
  4. перед процедурой нельзя курить или употреблять любой алкоголь.
  5. запрещается накануне сдачи крови изнурять организм физическими нагрузками.

Расшифровка результатов качественного ИФА-метода

В ответе на ИФА по качественному методу возможны два вида результата:

Если изучение образца показало отрицательное значение иммуноглобулинов групп М, G и А, то можно сказать либо об отсутствии недуга, либо о начальной стадии его развития. Такой же результат бывает у пациентов при окончательном выздоровлении, когда прошло уже достаточно большое количество времени.

Повышенный положительный титр IgM при значениях IgA и IgG со знаком «-» свидетельствует о протекании в организме пациента острой фазы инфекционного недуга.Если результат показал положительные значения всех трех видов иммуноглобулина (М, G и А), то это говорит о рецидиве инфекционного недуга, которое находится в острой или хронической фазе развития.

Расшифровка результатов количественного ИФА-метода

Количественный метод определяет концентрации искомых веществ в образце крови. Полученный результат может выражаться в следующих единицах измерения:

  1. ОП – единицы измерения оптической плотности характеризуют уровень концентрации антител в единице объема. Чем она выше, тем больше иммуноглобулинов в биоматериале.
  2. Некоторые из применяемых ИФА-методик предполагают наличие такого показателя как индекс позитивности в анализе. Коэффициент позитивности — это обозначение, аналогичное плотности образца.
  3. Параметры концентрации антител выражаются в миллилитрах, нанограммах (или нг/мл).
  4. В виде присутствующих символов: «-», «+», «?» (+, ++, +++ и более).

Не стоит забывать, что достоверно оценить количество найденных иммуноглобулинов и поставить окончательный диагноз может только опытный врач.Каждая тест-система имеет свои референтные значения. Варианты нормы и варианты патологических отклонений у них различные.

Преимущества метода

Единственным недостатком считается то, что ИФА относится к непрямым видам диагностики.

То есть, дает возможность определить только иммунный ответ человеческого организма на наличие возбудителя, а не самого возбудителя.

brulant.ru

Смотрите также